恒温荧光PCR仪是一种结合恒温扩增技术与荧光检测技术的实验设备,能够在恒定温度下对DNA或RNA进行快速、准确的扩增和定量检测。
恒温荧光PCR仪其技术原理介绍:
恒温扩增:
无需传统PCR的温度循环(变性、退火、延伸),通过特定酶系统(如Bst DNA聚合酶)和引物设计,在单一温度(通常为60-65℃)下完成核酸的持续复制。
常见技术包括LAMP(环介导等温扩增)、RPA(重组酶聚合酶扩增)、NASBA(依赖核酸序列的扩增)等。
荧光检测:
荧光染料嵌入法:如SYBR Green I等染料可嵌入双链DNA的凹槽中,荧光强度与双链DNA总量正相关,间接反映扩增产物的积累。
荧光探针法:如TaqMan探针、分子信标等,探针两端分别连接荧光基团和淬灭基团。扩增过程中,探针与模板结合后被切割或构象变化,荧光基团与淬灭基团分离,释放荧光信号。
数据采集与分析:
荧光信号被检测器捕获并转化为荧光值,根据荧光值的变化定量测定DNA的含量和扩增情况。
软件自动计算阈值(threshold),当荧光信号超过阈值时,记录对应的扩增时间(Tt值或Ct值的恒温替代指标),并根据标准曲线推算样本中靶标的初始浓度。