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一文带你快速了解恒温荧光扩增仪的原理

发布时间:2022-05-25 点击量:48
       恒温荧光扩增仪主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,而普通基因扩增仪是做定性分析和扩增基因片段,荧光定量基因扩增仪可以做普通基因扩增仪的工作,而反之就不行了,况且这样代价太大了,一般的实验室都不允许这样做的。总之两者的功能不能互相取代。
  普通基因扩增仪只能够定性地分析是否存在目标片段。但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。不过不能直接得到扩增结果,还需要做电泳检测。实际中检测遗传疾病,品种分子标记筛选,甚至亲自鉴定等都可以由普通基因扩增仪完成。
  但是,某些需要定量的实验就必须用到实时定量基因扩增仪了。比如检测某些病原物的数量(血液乙肝病毒复制程度),特定基因的表达量(比如结合反转录做的RNA定量分析),某些基因在染色体组中拷贝数等等。荧光定量基因扩增仪一般不需要对扩增产物进行电泳分析,操作相对简单些,但是耗材实在是贵。
  简单来说,普通基因扩增仪只能扩增,不能检测,便宜。荧光定量基因扩增仪除了扩增,还能在扩增的同时检测DNA发出的荧光信号,试剂和仪器都更贵。
  恒温荧光扩增仪原理:
  标记有荧光素的TaqMan探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的TaqMan探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得CT值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

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