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非洲猪瘟检测试剂拿到手不会使用?让我来教你

更新时间:2023-03-19 点击量:315
  非洲猪瘟检测试剂采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被纯化的ASF抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有ASF病毒特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。
  
  非洲猪瘟检测试剂的注意事项:
  
  1、试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃。
  
  2、不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。
  
  3、底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。
  
  4、TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。
  
  5、检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)。
  
  6、所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。
  
  7、严格遵守操作说明可以获得好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。
  
  8、血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的最大容量为300μl/孔。
  
  非洲猪瘟检测试剂的操作步骤:
  
  1、取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照1孔,阳性对照2孔,取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中,轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。
  
  2、盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育30分钟。
  
  3、小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。
  
  4、每孔加酶标记物100μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。
  
  5、小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6次,方法同3。切记最后在干净吸水纸上拍干。
  
  6、每孔加显色液100µl,轻微震荡混匀、盖上封板膜37℃闭光显色15分钟。
  
  7、每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。